生化危城

第281章 变异感染者DNA提取(2/2)

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4. 准备70c温浴。

5. 使用前检查buffer bL 是否有沉淀析出,若出现沉淀,请于70c温浴加热至沉淀完全溶解后再使用。

完成试剂准备工作之后,在钟教授的首肯之下,研究员开始进行dNA的提取。

具体操作步骤如下:

1. 向96 圆孔板的每孔中加入20 ul 蛋白酶K。

2. 加200 ul 抗凝全血到96 圆孔板中。

~undefined 若全血样品体积少于200 ul,用pbS 补充到200 ul。

~undefined 若样品为鸟类血,样品用量须低于10 ul。

~undefined 若需得到RNA-free 的基因组dNA,在步骤3 加入buffer bL 前加入dNase-free 的RNase A(20 mg\/ ml) 。

3. 加200 ul buffer bL ,注意不要打湿每孔的边缘,用96 圆孔硅胶片密封各孔。

4. 用力混合30 s。

5. 3000 rpm 简短离心使96 圆孔硅胶片上的溶液到96圆孔板内。启动离心机,当速度达到3000rpm后即停止。

6. 在培养箱或烘箱中70c温浴至少10 min。

7. 3 000 rpm 简短离心使96 圆孔硅胶片上的溶液到96圆孔板内。启动离心机,当速度达到3 000rpm后即停止。

8. 取下96 圆孔硅胶片,每孔加入200 ul 乙醇(96-100%)。

9. 用96 圆孔硅胶片密封各孔,用力混匀混合15 s。3 000 rpm 简短离心使96 圆孔硅胶片上的溶液到圆孔板内。启动离心机,当速度达到3 000 rpm 后即停止。

10. 将96 孔dNA 板放到一洁净的96 孔1.6 ml 深孔板。取下圆孔板上的96 圆孔硅胶片,将每孔中的溶液转移至96 孔dNA 板 中,6 000 rpm 离心4 min。

11. 丢弃96 孔1.6 ml 深孔板的滤液,将96 孔dNA 板放回到96 孔1.6 ml 深孔板上,每孔加入500 ul buffer w1b,用一新的bF-400 膜密封96 孔dNA 板,6 000 rpm 离心4 min。

~undefined 确认在buffer w1b concentrate 中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。

12. 丢弃96 孔1.6 ml 深孔板的滤液,将96 孔dNA 板放回到96 孔1.6 ml 深孔板上,每孔加入850 ul buffer w2,用另一新 的bF-400膜密封96孔dNA板,6 000 rpm 离心4 min。

~undefined 确认在buffer w2 concentrate 中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。

13. 弃滤液,将96孔dNA板放回到96孔1.6 ml 深孔板上,每孔加入400 ul buffer w2, 用另一新的bF-400 膜密封96 孔dNA 板,6 000 rpm 离心4 min。

14. 将96孔dNA板放在一洁净的96 孔1.6 ml 深孔板上,用bF-400膜密封96孔dNA板,6 000 rpm离心15 min。

15. 将96孔dNA板放在另一洁净的96 孔1.6 ml 深孔板上,每孔加入100-200 ul Eluent b 或去离子水,室温静置2 min,用另一新的bF-400膜密封96 孔dNA板,6 000 rpm 离心4min洗脱得到dNA。

看着最终提取出来的dNA样本,钟教授终于露出了满意的微笑......

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